一图读懂PCR(耗材、试剂、仪器)的前世今生(销售必备)

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来源:公众号“微流控学习”,《PCR耗材篇(微流控芯片)》

聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,简称PCR)是分子生物学领域的一项革命性技术,自1985年由美国科学家Kary Mullis发明以来,已广泛应用于基因克隆、DNA序列分析、基因突变分析、遗传病诊断、肿瘤检测等多个领域。PCR技术的核心在于通过特定的引物,在DNA聚合酶的作用下,将待扩增的DNA片段进行指数级放大,从而实现对特定DNA序列的快速、高效检测。PCR技术的成功应用离不开高质量的试剂耗材和仪器的支持

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PCR试剂

PCR试剂PCR实验中的关键组成部分,主要包括DNA聚合酶引物、dNTPs(脱氧核糖核苷酸)、缓冲液等。

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DNA聚合酶是PCR反应中的核心酶,负责催化DNA的合成。根据来源和性质的不同,DNA聚合酶可分为多种类型,如Taq DNA聚合酶、Pfu DNA聚合酶等。Taq DNA聚合酶因其耐热性好、扩增效率高而广泛应用于常规PCR实验中。然而,Taq DNA聚合酶缺乏3’到5’的外切酶活性,可能导致非特异性扩增和碱基错配。因此,在某些需要高保真度的PCR实验中,需要使用具有3’到5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶,如Pfu DNA聚合酶。

引物是PCR反应中的另一关键组分,其设计与合成质量直接影响PCR扩增的特异性和效率。引物的设计应遵循一定的原则,如引物长度、GC含量、引物间的互补性、引物与模板的特异性等。高质量的引物应具有高度的特异性、良好的稳定性和较低的合成成本。随着合成技术的不断发展,现已能够实现长链引物、修饰引物等多种类型引物的合成,以满足不同PCR实验的需求。

dNTPs是PCR反应中的原料,包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP四种脱氧核糖核苷酸。dNTPs的纯度和浓度对PCR反应的扩增效率和特异性具有重要影响。高质量的dNTPs应具有高纯度、低内毒素、低降解等特点,以保证PCR反应的稳定性和可靠性。

缓冲液在PCR反应中起到维持反应体系pH值和离子强度的作用。不同的PCR实验可能需要不同成分的缓冲液,以优化反应条件。缓冲液的选择应根据具体的PCR体系和实验需求进行。
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PCR耗材

PCR管和PCR板是PCR实验中用于承载反应体系的容器。PCR管通常为一次性使用,具有良好的密封性和耐高温性能。PCR板则适用于高通量PCR实验,能够同时处理多个样本,提高实验效率。在选择PCR管和PCR板时,应关注其材质、耐高温性能、密封性等因素,以确保实验结果的准确性和可靠性。

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移液器吸头是PCR实验中用于加样和取样的工具。高质量的移液器吸头应具有良好的吸液性能、精确的计量范围和较低的残留量。在使用移液器吸头时,应注意避免交叉污染和吸头的重复使用,以保证实验的准确性和安全性。

PCR耗材选择可参考:怎样正确选择荧光定量PCR耗材?
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PCR仪器

PCR仪器是分子生物学实验室中不可或缺的重要设备,通过精确控制温度循环来实现DNA的扩增。PCR仪器内部通常由加热模块、温度传感器、光学检测系统、计算机控制系统等多个部分组成,共同确保PCR反应的高效和准确。

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加热模块是PCR仪器的核心部件,它负责提供并维持反应所需的不同温度,如变性、退火和延伸温度。温度传感器则实时监控加热模块的温度,确保温度变化的准确性和稳定性。光学检测系统则用于实时荧光定量PCR仪中,能够检测PCR过程中产生的荧光信号,从而实时分析扩增产物的情况。

除了基本的加热、温度监控和荧光检测功能外,现代PCR仪器还具备多种智能化特性。例如,许多仪器支持用户自定义PCR程序,以满足不同实验的需求。同时,一些高端仪器还具备数据分析功能,能够自动处理实验结果,大大提高了实验的便捷性和效率。

此外,PCR仪器还具有高度的自动化和集成化特点。自动化功能使得仪器能够自动完成PCR反应的全过程,减少了人为操作的误差。而集成化设计则使得仪器更加紧凑、易于携带,适用于各种实验环境。PCR仪器根据不同的应用需求,PCR仪器可分为多种类型,每种类型都有其独特的特点和适用场景。

1. 普通PCR仪

普通PCR仪是最基本的PCR扩增设备,通常只进行单一的PCR扩增反应,而不具备其他复杂功能。这类仪器通常具有简单、易用、成本较低等特点,适合用于常规的PCR扩增实验。

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2. 实时荧光定量PCR仪

实时荧光定量PCR仪在普通PCR仪的基础上增加了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。它能够在PCR反应过程中实时监测荧光信号的变化,从而实现对DNA或RNA的定量检测。这种仪器具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点,广泛应用于基因表达分析、病原体检测等领域。

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3. 梯度PCR仪

梯度PCR仪是一种能够设置不同退火温度条件的PCR扩增设备。它能够在一次实验中同时探索多个退火温度下的PCR扩增效果,从而找到最佳的退火温度,提高PCR扩增的效率和特异性。这种仪器多用于科研和教学机构,以探索和优化PCR反应条件。

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4. 原位PCR仪
原位PCR仪主要用于从细胞内靶DNA的定位分析,实现细胞内基因扩增。它能够在细胞层面上进行PCR扩增,从而实现对特定基因在细胞内的定位和表达情况的研究。这种仪器在细胞生物学和病理学等领域具有广泛的应用前景。
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5. 数字PCR仪
数字PCR仪主要用于检测和定量DNA或RNA样本中的特定目标序列。它利用微滴或微芯片技术将PCR反应体系分隔成成千上万个独立的微反应单元,每个单元内包含一个或数个DNA模板分子,并在PCR扩增后进行终点检测,根据泊松分布原理及阳性微滴的比例推算出原始模板分子的浓度或拷贝数。

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这些PCR仪器各具特色,科研人员和实验室可以根据实验的具体需求选择合适的仪器类型。在选择时,还需考虑仪器的性能、稳定性、易用性等因素,以确保实验结果的准确性和可靠性。同时后疫情时代,随着国内生物医学行业的水平的提升,PCR试剂、PCR耗材、PCR仪器市场逐渐面临了寒冬,多家试剂、耗材、仪器企业终止IPO,业绩下行,裁员降本,追求销售业绩,不断融资,为确保企业生存。

最后小编有话说,国内PCR试剂、耗材及仪器市场趋于饱和,厂家不断相互竞争国内市场份额,以其厂家相互低价竞争,为何不谋求海外市场份额,寻求突破口,拓宽渠道。


撰文 | NIRO

编辑 | 小彭

来源 | 原创

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