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十分钟教会你:如何搞定蛋白定点缺失突变
本文介绍了蛋白定点缺失突变的构建方法,核心原理是将同源重组技术与反向PCR结合,在引物5'端添加15-20 bp同源序列,以目标质粒为模板进行反向PCR扩增,获得缺失目标片段的线性化全长质粒,再通过大肠杆菌体内同源重组修复系统使其环化。以GLUT1蛋白的ICH结构域缺失为例,展示了靶点设计、引物设计工具使用及实验流程(包括反向PCR、电泳检测、DpnI消化和转化),强调缺失碱基数需为3的…- 1
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定点缺失突变
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